Kit de detección de lon ferrosos con método fluorescente FerroOrange

 

Nombre del producto	Gato.No.	Especulación.
Kit de detección de lon ferroso con método fluorescente FerroOrange	G1727-100T	100 T

 

 

FerroOrange, también conocido como RhoNox-4, detecta específicamente iones ferrosos (II) libres intracelulares (Fe²⁺). El principio básico del kit es que después de que FerroOrange reacciona con iones ferrosos, se genera irreversiblemente un producto de fluorescencia naranja y su intensidad de fluorescencia es proporcional al contenido de iones ferrosos en la célula. Ni los iones de hierro (III) (Fe³⁺) ni los iones metálicos divalentes distintos del hierro aumentan su intensidad de fluorescencia. FerroOrange es altamente permeable a la membrana celular y puede permanecer en la célula después de una reacción rápida, por lo que es adecuado para obtener imágenes de células vivas.

Basado en los principios de detección anteriores, este kit toma FerroOrange como cuerpo principal y proporciona un tampón de soporte especial y un inductor positivo. Se pueden usar microscopios de fluorescencia, instrumentos de etiquetado de enzimas y otros instrumentos correspondientes para detectar iones ferrosos en células vivas, lo cual es conveniente de usar y sensible de detectar.

 

 

Enviar con hielo seco; Almacenar a -80 grados protegido de la luz durante 6 meses.

 

 

Número de componente	Componente	G1724-100T
G1727-1	Sonda fluorescente FerroOrange	20 μL
G1727-2	Tampón de detección de iones ferrosos	20ml
G1727-3	Inductor positivo de iones ferrosos	2×1mL
Manual		1 pieza

Nota:Los tiempos de reacción del kit anteriores corresponden al 96-sistema de ensayo en placa de pocillos.

 

 

1. Preparación previa al experimento:Las células se inoculan en 96-placas de pocillos y se pretratan de acuerdo con el propósito experimental;

2. Configuración deferronaranjasolución de trabajo: Prepare la solución de trabajo FerroOrange según la necesidad, el sistema de configuración se puede consultar en la siguiente tabla, tenga en cuenta que las diferentes características de las celdas son diferentes, según la situación real del experimento se puede agregar o reducir la concentración de la sonda utilizada, la proporción de dilución inicial recomendada de 1:500; Antes de la preparación, agite y centrifugue brevemente la sonda fluorescente FerroOrange para garantizar que todos los reactivos estén sumergidos en el fondo del tubo;

 

	grupo experimental	grupo de control
Sonda fluorescente FerroOrange	0.2 μL	0.2 μL
Tampón de detección de iones ferrosos	100 μL	90 μL
Inductor positivo de iones ferrosos		10 μL

 

3. Marcadores de tinción(con células adherentes como ejemplo; el tratamiento con células en suspensión requiere centrifugación):

3.1. Retire el medio de cultivo celular original y lave las células 1-2 veces con PBS u otros tampones;

3.2. Retire el tampón de lavado, agregue 100 μl de solución de trabajo Fluo-4 AM a cada pocillo e incube en una incubadora de células a 37 grados durante 30 minutos protegido de la luz;

3.3. Retire la solución de trabajo de FerroOrange al final de la incubación y lave las células 1-2 veces usando PBS u otros tampones;

3.4. Agregue 100 l de PBS u otra solución tampón para cubrir las células adherentes o resuspenda el sedimento celular para la siguiente detección de fluorescencia;

4. Detección de fluorescencia: Utilice microscopio de fluorescencia, marcador enzimático y otros instrumentos para realizar su detección. FerroOrange es fluorescente de color naranja con EX/EM ≈ 543/580 nm. La intensidad de fluorescencia del grupo de control positivo tratado con inductor positivo debería ser más débil que la del grupo experimental.

 

 

1. Debido a las diferentes propiedades intercelulares y los diferentes métodos de pretratamiento, la proporción de uso de la sonda y el rango de tiempo de incubación descritos en los pasos son solo de referencia y se pueden ajustar según circunstancias específicas.

2. Los tintes fluorescentes tienen problemas de extinción, preste atención para evitar la operación con luz para ralentizar la extinción de la fluorescencia.

3. FerroOrange es muy sensible a la humedad, así que empáquelo adecuadamente de acuerdo con el arreglo experimental cuando lo use por primera vez.

4. FerroOrange solo puede detectar hierro bivalente libre y no puede detectar hierro unido.

5. El aumento de la intensidad de la fluorescencia después de la reacción de FerroOrange con Fe²⁺es irreversible y no se puede utilizar para el monitoreo dinámico en tiempo real de los niveles de iones ferrosos.

6. Según el principio de funcionamiento de esta sonda, no es posible tratar las células como fijación o perforación.

7. Un poco de precipitación después de la descongelación es un fenómeno normal y se agita completamente antes de usarlo para garantizar que se disuelva por completo.

8. Para su salud y seguridad, use bata de laboratorio y guantes durante la operación.

 

¡Solo para uso en investigación!

 

 

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