Kit de tinción de fluorescencia verde de membrana celular DiO

 

Nombre del producto	Gato. No	Especulación.
Kit de tinción de fluorescencia verde de membrana celular DiO	G1704	100-1000 T

 

 

DiO, también conocido como DiOC18(3), 3-octadecil-2-[3-(3-octadecil-2(3H)-benzoxazol-2-ilideno )El perclorato de -1-propen-1-il]benzoxazol, con un peso molecular de 881,72, es una clase de lipófilo de cadena larga. Tintes de dialquildicarbocianina, tintes fluorescentes, comúnmente utilizados en el etiquetado de membranas celulares y otras estructuras biológicas liposolubles. Después de ingresar a la membrana celular, el DiO puede difundirse lateralmente y teñir gradualmente toda la membrana celular. La fluorescencia del DiO es muy débil antes de ingresar a la membrana celular, y la intensidad de la fluorescencia aumentará considerablemente cuando se una a la célula y puede emitir fluorescencia verde. después de la excitación y puede detectarse mediante filtros FITC estándar. La longitud de onda máxima de excitación del DiO es de 484 nm y la longitud de onda máxima de emisión es de 501 nm. Según las características del DiO, puede teñir tanto células vivas como células fijas. Además. Las sondas de DiO generalmente no afectan la viabilidad de las células, por lo que se pueden utilizar células marcadas directa o inversamente o algunas sustancias (exosomas) como detección de trazadores.

El kit de tinción de fluorescencia verde de membrana celular DiO contiene una sonda de fluorescencia DiO y un tampón de tinción optimizado, que puede hacer que la tinción de la membrana celular sea más rápida y la fluorescencia sea más brillante y estable.

 

 

Enviar con hielo seco; almacenar a -20 grados en la oscuridad, válido por 6 meses.

 

 

Número de componente	Componente	G1704
G1704-1	Sonda fluorescente verde de membrana celular DiO	400 μL
G1704-2	Tampón de tinción	100ml
Manual		una copia

 

 

1. Preparación de la solución de trabajo de tinción de DiO:

Mezcle y diluya la sonda fluorescente verde de membrana celular DiO con tampón de tinción en una proporción de 1:250 para preparar la solución de trabajo de tinción DiO (lista para usar); Tenga en cuenta que la relación de dilución de la sonda DiO se puede ajustar a 1:250-1:500 según la situación específica para obtener el mejor efecto de tinción.

2. Tinción de células vivas en suspensión

2.1. Centrifugar las células suspendidas a 500-1,000×g a temperatura ambiente durante 3-5 min, retirar el sobrenadante de células;

2.2. Agregue la cantidad adecuada de solución de trabajo de tinción Dio para resuspender las células hasta una densidad celular final de 1-2×106 células/ml.

2.3. Incubar a 37 grados en la oscuridad durante 5-20 min. El tiempo de incubación óptimo varía para diferentes células. Comience con 5 minutos y optimice el tiempo de incubación según el resultado final de la tinción.

2.4. Al final de la incubación, centrifugar a 500-1000 g durante 3-5 min a temperatura ambiente y aspirar la solución de trabajo de tinción de DiO;

2.5. Las células se resuspendieron con PBS precalentado o medio de cultivo celular a 37 grados y se centrifugaron a 500-1000 g durante 3-5 min para eliminar el sobrenadante;

2.6. Repita el paso 2.5.

2.7. Detectado mediante citometría de flujo directamente o mediante microscopía de fluorescencia después de transferir las células a una placa de varios pocillos, una placa de cultivo celular o un portaobjetos de escalada celular. Dio tiene un máximo de excitación a 484 nm y un máximo de emisión a 501 nm.

3. Tinción de células vivas adherentes (6-placa de pocillos como ejemplo):

3.1. Sembrar células adherentes en 6-placa de pocillos a una determinada densidad.

3.2. Retire el medio de cultivo y lave las células dos veces con PBS (recomendado G4202). Agregue 1 ml de solución de trabajo de tinción Dio (placas de pocillos de otro tamaño, ajustadas según corresponda para garantizar que el tinte cubra las células);

3.3. Incubar a 37 grados en la oscuridad durante 5-20 min. El tiempo de incubación óptimo varía para diferentes células. Comience con 5 minutos y optimice el tiempo de incubación según el resultado final de la tinción.

3.4. Aspire la solución de trabajo de tinción de membrana celular y lave las células 1-2 veces con PBS precalentado o medio celular.

3.5. Agregue medio de cultivo celular precalentado o medio celular a 37 grados y detecte las células mediante microscopía de fluorescencia. Dio tiene un máximo de excitación a 484 nm y un máximo de emisión a 501 nm.

4. Tinción de células adherentes fijas:

4.1. Preprocesamiento de muestras:

Para las células: retire el medio celular y lave 1-2 veces con PBS. Agregue una solución fijadora de paraformaldehído al 4 % (se recomienda G1101) durante 10 minutos a temperatura ambiente. Retire la solución fijadora y lave 2-3 veces con PBS;

4.2. Permeabilización: Añadir 0.1-0.5% Triton-100 (preparado con PBS) y permear durante 10 min a temperatura ambiente. Retire la solución de permeabilización y lave 2-3 veces con PBS.

4.3. (Etiquetado inmunofluorescente opcional) Incubar con anticuerpos según el protocolo de inmunotinción o incubar con otros tintes.

Nota: La solución de bloqueo, el diluyente de anticuerpos y la solución de lavado para inmunotinción no deben contener detergentes.

4.4. Agregue una cantidad adecuada de solución de trabajo de tinción de DiO para cubrir las células, incube a 37 grados lejos de la luz durante 5-20 min y aspire la solución de trabajo de tinción de DiO. Se recomienda ajustar el tiempo de tinción a la muestra de células específica para obtener resultados de tinción óptimos;

4.5. Las células se lavaron 2-3 veces con PBS y luego se colocaron bajo un microscopio de fluorescencia para su observación (las células deben cubrirse con la cantidad adecuada de PBS). El DiO tiene una longitud de onda de excitación máxima de 484 nm y una longitud de onda de emisión máxima de 501 nm.

5. Marcado fluorescente de exosomas:

5.1. Se resuspendió la precipitación del exosoma con una cantidad adecuada de solución de trabajo de tinción con DiO.

5.2. Incubar a 37 grados durante 30 min en la oscuridad.

5.3. (opcional) Diluya la muestra con PBS 10- veces su volumen.

5.4. Se extrajeron los exosomas nuevamente según el protocolo de extracción anterior para eliminar el exceso de tintes.

5.5. Recoger la precipitación de los exosomas y resuspenderlos en PBS para obtener exosomas marcados con DIO. Puede utilizarse para experimentos posteriores, como la captación celular.

 

 

1. Todos los tintes fluorescentes tienen problemas de extinción; protéjalos de la luz durante la operación para ralentizar la extinción de la fluorescencia.

2. Debido a que la sonda es lipófila, evite utilizar reactivos que contengan glicerina u otra materia orgánica.

3. Si se requiere fijación, recomendamos fijar en paraformaldehído al 4%. Otras soluciones de reparación inadecuadas provocarán un fondo de alta fluorescencia.

4. La relación de dilución óptima y el tiempo de incubación de la sonda deben ajustarse según la situación real debido a la diferente sensibilidad entre las células y los requisitos experimentales.

5. Para su seguridad y salud, use gafas de seguridad, guantes o ropa protectora.

 

¡Solo para uso en investigación!

 

 

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