Perlas magnéticas purificadas del anticuerpo SweMagrose Protein A/G

La proteína A es una proteína de la superficie de la pared celular que se encuentra enEstafilococo áureocon un peso molecular de 42 kDa. La proteína G es una proteína fijadora de inmunoglobulinas expresada porestreptocócico bacterias(C o G). La proteína A y la proteína G son funcionalmente similares y pueden unirse específicamente a la inmunoglobulina (Ig) de mamíferos. Las proteínas A y G recombinantes con modificaciones apropiadas unidas a perlas magnéticas se pueden utilizar para inmunoprecipitación o purificación de anticuerpos. mientras que las perlas magnéticas de proteína G son adecuadas para la inmunoprecipitación de anticuerpos policlonales IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 humanos, IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3 de ratón, IgG1, IgG2a, IgG2b e IgG2c de rata. Las perlas magnéticas de proteína A son adecuadas para la inmunoprecipitación de IgG1, IgG2, IgG4 humana, IgG2a e IgG2b de ratón. (Ver Tabla I para información específica)

Este producto adopta las perlas magnéticas marcadas con proteína Proteína A/G de desarrollo y producción propia. En comparación con productos similares en el mercado, este producto se une a los anticuerpos de manera más eficiente y tiene una tasa de unión no específica más baja, junto con el tampón optimizado. puede resultar conveniente y eficaz para experimentos de inmunoprecipitación; Puede usarse ampliamente en el aislamiento y purificación de las proteínas diana en muestras como lisados ​​​​celulares, sobrenadantes de secreciones celulares, suero, ascitis, etc.

Enviar con hielo mojado; Conservar a 4 grados, validez de 12 meses.

Las formulaciones de reactivos relacionados con la purificación de anticuerpos se refieren a lo siguiente, el usuario puede ajustarlas de acuerdo con condiciones experimentales específicas.

Manual procedimiento (purificación de ratón ascitis IgG como un ejemplo)

1. Muestra tratamiento: Tome 500 l de muestra de ascitis, agregue el tampón de lavado de unión para completar 500 l. Si hay más precipitados de proteínas en la muestra, centrifugue el sobrenadante para experimentos, lo que puede mejorar la pureza del anticuerpo.

2. Magnético talón pretratamiento:Agite con agitador las perlas magnéticas purificadas del anticuerpo durante 30 s para resuspenderlas lo suficiente, tome 100 μL de perlas magnéticas purificadas del anticuerpo de proteína A SweMagrose al 10 % (v/v) en otro tubo EP nuevo de 1,5 ml, aspire magnéticamente y deseche el sobrenadante, lávelo con 1 ml de tampón de lavado de unión dos veces y luego tomar el sobrenadante después de aspirar magnéticamente.

Nota: La cantidad de perlas se puede ajustar según la cantidad de anticuerpo en la muestra.

3. Anticuerpo adsorción:Agregue la muestra procesada en el paso 1 a las perlas magnéticas en el paso 2, agite y mezcle bien, coloque el tubo EP en un mezclador giratorio o gire manualmente el tubo suavemente a temperatura ambiente (aproximadamente 25 grados) para que las perlas magnéticas entren en pleno contacto con la muestra, darle la vuelta durante 15 min y luego colocarla en la rejilla del separador magnético durante 30 s y luego desechar el sobrenadante.

4. Magnético talón lavado: Añadir 1 ml de tampón de lavado de unión al tubo EP, resuspender con agitación y luego absorber magnéticamente durante 30 s. Desechar el sobrenadante y repetir la operación 3 veces.

5. Anticuerpo elución: Agregue {{0}}.5 ~ 1,0 ml de eluyente a los tubos EP con las perlas magnéticas lavadas como se describe anteriormente y resuspenda los tubos rápidamente pipeteando o agitando en vórtex y luego voltee suavemente los tubos. mezclador o a mano a temperatura ambiente (aproximadamente 25 grados), y luego separe los tubos mediante succión magnética después de darles la vuelta durante 10 minutos, y luego recoja el sobrenadante en nuevos tubos EP.

6. Anticuerpo neutralización: Agregue una cierta cantidad de solución de neutralización al eluato de anticuerpo en el paso 5, generalmente 1/10 del volumen de elución del anticuerpo (p. ej., si el eluido de anticuerpo es 500 μL, la cantidad de solución de neutralización agregada es 50 μL), de modo que el pH El valor del anticuerpo eluido se mantiene en un entorno neutro, lo que favorece el mantenimiento de la actividad biológica del anticuerpo y evita la inactivación del anticuerpo.

7. Post-tratamiento de magnético rosario:Lavar las perlas dos veces con solución de elución después de su uso, separarlas magnéticamente y desechar el sobrenadante; luego lavar tres veces con solución de lavado aglutinante, separar magnéticamente y desechar el sobrenadante; resuspender las perlas con 200 µL de solución de conservación y luego almacenar a 2 ~ 8 grados.

1. Lea atentamente estas instrucciones antes de continuar con la purificación de anticuerpos.

2. No congele ni centrifugue las perlas, ya que esto puede causar una agregación irreversible de las perlas.

3. La operación manual requiere el uso de un marco de separación magnético.

Tabla 1

Sólo para uso en investigación. ¡No apto para uso en procedimientos diagnósticos o terapéuticos!

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