Líquido de tinción de peróxido de hidrógeno vegetal (DAB)

Los tejidos vegetales producen una variedad de especies reactivas de oxígeno (ROS) en condiciones de estrés. La actividad de ROS es muy grande y extremadamente inestable, por lo que la detección de ROS suele depender de sus productos finales. El peróxido de hidrógeno es un tipo de especie reactiva de oxígeno. Catalizado por catalasa, el peróxido de hidrógeno puede reaccionar rápidamente con DAB (tetraclorhidrato de 3, 3-diaminobencidina) para formar un compuesto de color marrón rojizo, a fin de localizar el peróxido de hidrógeno en los tejidos. Según el principio básico, también se denomina método DAB. Basado en el principio anterior, este producto se utiliza para teñir con peróxido de hidrógeno en tejidos vivos de plantas. Generalmente se aplica a las tiernas puntas de las raíces, hojas y otras manchas generales; después de teñir, el sitio de acumulación de peróxido de hidrógeno es de color marrón a marrón oscuro.

Transporte de hielo húmedo; Conservar a 2-8 grado, validez de 12 meses.

1. Preparación del reactivo: se disolvieron completamente 100 mg de DAB en 100 ml de tampón fosfato para obtener una solución de trabajo de tinción de DAB, que se almacenó a 4 grados bajo luz y fue efectiva en una semana. Nota: DAB es sensible a la luz y debe protegerse de la luz durante el proceso de disolución. Si es difícil de disolver, la disolución se puede promover mediante agitación ultrasónica y magnética.

2. Recolecte plántulas o puntas de raíces de plantas sometidas a estrés (como metales pesados), lávelas ligeramente con agua pura y colóquelas sobre papel de filtro para drenar el exceso de agua. Las plántulas de plantas o las puntas de las raíces se sumergieron en una solución de tinte de trabajo de tinción DAB a temperatura ambiente y se mantuvieron alejadas de la luz durante 2-6 h hasta que la parte positiva apareció de color marrón oscuro y las partes restantes eran casi incoloras o mostraban el color de la planta. sí mismo. (Ajustar el tiempo de teñido según el grado de juventud y desarrollo del color de las plantas)

3. Retire con cuidado las plántulas u hojas de la planta con unas pinzas, sumérjalas en agua pura y enjuáguelas 3-5 veces, colóquelas en papel de filtro para eliminar el exceso de agua y luego sumérjalas en etanol al 95 %. a 40 grados durante 3-16 h. El propósito es eliminar la clorofila de las plántulas o de las hojas de las plantas, y el etanol fresco al 95% se puede reemplazar muchas veces durante la decoloración.

4. Saque las plántulas u hojas con unas pinzas, sumérjalas en agua pura y enjuáguelas 3-5 veces, colóquelas en papel de filtro para eliminar el exceso de agua, transfiera las muestras a una cantidad adecuada de muestra DAB. solución de conservación y remójelos durante 30 minutos, luego tome fotografías. Las muestras se pueden almacenar en la solución a temperatura ambiente durante una semana.

1. Después de preparar la solución de trabajo de tinción DAB, debe almacenarse a 4 grados, mantenerse alejada de la luz y usarse dentro de una semana. El tiempo de almacenamiento es demasiado largo y afectará el color.

2. Dado que el peróxido de hidrógeno es fácil de descomponer y cualquier factor externo puede estimular el estrés de las plantas para producir peróxido de hidrógeno, las muestras de plantas deben recolectarse frescas y teñirse lo antes posible. Se recomienda un grupo de control en blanco negativo y positivo.

3. Tome fotografías lo antes posible para guardar los resultados después de la tinción de la muestra.

4. Use una bata de laboratorio y guantes desechables durante la operación.

¡Solo para uso en investigación!

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