Kit de PCR directa en sangre

El kit puede amplificar directamente muestras de sangre completa sin extracción de ADN ni preparación de muestras. Es adecuado para sangre fresca, sangre almacenada a 4 grados o congelada que contenga anticoagulantes convencionales como EDTA, heparina y citrato, y manchas de sangre seca en Whatman903.^®y TLC^®tarjetas, el ADN diana genómico y exógeno se puede amplificar eficazmente.

Después de una serie de optimizaciones, la mezcla maestra de PCR directa de sangre 2x proporcionada por este kit, combinada con el potenciador de PCR directa de sangre proporcionado, mostró un efecto antiinhibitorio muy alto en la expansión directa de la sangre y la longitud de amplificación podría alcanzar los 5 kb. Además, con la adición de tinte de carga a este producto, el producto de PCR se puede utilizar directamente para la electroforesis en gel de agarosa. El producto puede usarse ampliamente en la identificación de muestras de sangre de alto rendimiento.

2×Blood Direct PCR Master Mix debe enviarse con hielo húmedo y almacenarse a -20 grado; Otros reactivos se envían con hielo húmedo y se almacenan entre 2 y 8 grados; Válido por hasta 12 meses.

1. Sistema de reacción de PCR recomendado

a. La concentración final de cebadores varía de {{0}}.2 μM a 1,0 μM, y la concentración recomendada de cebadores es 0,4 μM. Muy pocos cebadores pueden provocar un bajo rendimiento de amplificación o ninguna amplificación, y un exceso de cebadores puede provocar una amplificación no específica.

b. La cantidad de sangre se puede agregar entre 1 y 20 %, y se recomienda un 5 %. Manchas de sangre seca en Whatman903^®y TLC^®Las tarjetas comerciales se pueden cortar a 1 ~ 2 mm.²tamaño con un punzón o unas tijeras. Nota: para lograr el mejor efecto de PCR, utilice la pipeta para agregar lentamente la sangre al sistema de reacción y precipitarla en el fondo del tubo de reacción. Después de añadir la muestra de sangre, el sistema de reacción no se puede mezclar. La tarjeta de sangre se puede agregar al tubo de reacción con anticipación y luego se puede agregar el resto del sistema de reacción para garantizar que esté sumergido en el sistema de reacción.

2. Condiciones de PCR recomendadas:

a. La temperatura de recocido adecuada se puede seleccionar según el valor Tm de la imprimación..

b. El tiempo de extensión de un fragmento más corto (menor o igual a 2 kb)es 15 s/kb; tEl tiempo de extensión del fragmento más largo (2~5 kb)es 30 s/kb.

1. Lea atentamente el Manual del producto antes de usarlo.

2. Después de la amplificación, centrifugar a 1,000×g o 4,000 rpm durante 1~3 min, utilizando el sobrenadante para electroforesis.

3. Para el almacenamiento prolongado de sangre anticoagulante, se deben evitar en la medida de lo posible los coágulos de sangre.

4. En general, se puede lograr un buen efecto de PCR cuando la concentración en sangre total es del 5%. De lo contrario, la concentración en sangre se puede ajustar entre 1 y 20 % según la situación real.

5. Las aves u otros glóbulos rojos nucleados pueden reducir la cantidad de sangre.

6. Para la preparación y subenvasado de la solución de reacción, utilice una punta de pipeta nueva para evitar la contaminación cruzada.
 

¡Solo para uso en investigación!

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